蛋白質含量測定方法

更新時間：2010-11-10 點擊次數：10462

蛋白質含量測定方法一般來說，有以下五種：凱氏定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）、紫外吸收法和考馬斯亮藍法（Bradford法）。

表五種蛋白質含量測定方法的比較

方法	靈敏度	時間	原理	干擾物質	說明
凱氏定氮法（Kjedahl法）	靈敏度低，適用于0.2~ 1.0mg氮，誤差為 ±2％	費時 8～10小時	將蛋白氮轉化為氨，用酸吸收后滴定	非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質而分離）	用于標準蛋白質含量的準確測定；干擾少；費時太長
雙縮脲法（Biuret法）	靈敏度低 1～20mg	中速 20~30分鐘	多肽鍵＋堿性Cu²^＋®紫色絡合物	硫酸銨； Tris緩沖液；某些氨基酸	用于快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法	較為靈敏 50～100mg	快速 5～10分鐘	蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收	各種嘌吟和嘧啶；各種核苷酸	用于層析柱流出液的檢測；核酸的吸收可以校正
Folin－酚試劑法（Lowry法）	靈敏度高～5mg	慢速 40～60 分鐘	雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原	硫酸銨； Tris緩沖液；甘氨酸；各種硫醇	耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法（Bradford法）	靈敏度zui高 1～5mg	快速 5～15分鐘	考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其lmax由465nm變?yōu)?95nm	強堿性緩沖液； TritonX-100; SDS	的方法；干擾物質少；顏色穩(wěn)定；顏色深淺隨不同蛋白質變化

從以上表格中可以得出，不同的方法有不同的特點和優(yōu)勢，如紫外吸收法測定時間快。但是綜合起來，zui后一種考馬斯亮藍法（Bradford法）效率zui高，無論是測定時間，靈敏度還是受干擾程度，都是比較占優(yōu)勢的。

下面，我們來重點介紹一下其中一種蛋白質含量測定方法--凱氏定氮法。

凱氏定氮法（Kjedahl法）

首先將濃硫酸倒入樣品中，邊倒邊搖晃，以使?jié)饬蛩崤c樣品充分接觸，然后加熱試劑。如果你需要加快實驗進度，可以加入CuSO4作催化劑，這樣，實驗的反應時間就會大大縮短。CH₂COOH和H₂SO₄反應生成氨氣，然后氨氣又與H₂SO₄發(fā)生作用，固定了氮元素。這時我們得到了（NH₄）₂SO₄的溶液，然后我們可以用NaOH去跟硫酸銨反應，通過計算NaOH的使用量，就可以計算出氮的含量。下面是整個定氮法中發(fā)生的化學反應。

CH₂COOH+ 3H₂SO₄= 2CO₂ + 3SO₂ +4H₂O +NH₃ （1）

2NH₃ + H₂SO₄= （NH₄）₂SO₄ （2）

（NH₄）₂SO₄+ 2NaOH =2H₂O +Na₂SO₄ + 2NH₃ （3）

當我們得到氮的含量以后，我們就可以通過一定的計算，zui終算出蛋白質的含量。

凱氏定氮法常用于有機化合物中的氮含量的測定，是蛋白質含量測定的經典方法，雖然在測試過程中，試劑用量很大，但是，不可否認，它所適用的樣品范圍之廣，測試結果之，都是*的。

現在，隨著科技的發(fā)展，我們已經研究出帶消化爐的凱氏定氮儀，它把定氮過程中的前兩步驟通過儀器完成，方便了整個過程的實施。凱氏定氮儀能夠自動的對樣品進行消化，然后蒸餾，智能化完成，節(jié)省了時間和精力，提高了工作效率。這種具有有準確、快速、簡便、低耗、穩(wěn)定的優(yōu)點。浙江托普儀器有限公司提供這種產品，24小時：。

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